产品货号：
BTN14-15850
中文名称：
牛肾盂肾炎棒杆菌荧光定量PCR试剂盒(染料法)
英文名称：
Corynebacterium renale qPCR Kit(SYBR)
产品规格：
50次
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本产品是以染料法荧光定量PCR技术为基础开发的专门检测牛肾盂肾炎棒杆菌的试剂盒。
肾棒状杆菌(Corynebacterium Renale)革兰氏染色阳性，为球杆状或棍棒状，呈单在、成丛或栅栏样排列。细菌性肾盂肾炎由肾棒状杆菌引起，主要发生于母牛，公牛少见，马和绵羊偶可发生。本病为尿源性感染，因此病原菌经尿道生殖道口感染后，先引起尿道炎、膀胱炎或子宫内膜炎，然后再逆行导致肾盂肾炎。由于肾组织损伤与尿液滞留，最终病畜可因尿毒症而死亡。病牛主要表现发热，食欲不振，尿频，尿少，尿因混有黏液、脓液、大量蛋白质、脓细胞和白细胞、脱落的上皮细胞等而浑浊带血色。尿液涂片或细菌培养可发现病原菌。严重病例常发生尿毒症。
保存：-20℃，有效期一年。
一、制备标准曲线样品(以102～107拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)。
由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的DNA片段作为阳性对照。
二、样品DNA的制备
三、设置qPCR反应(20μL体系，在样品制备室进行)
四、数据处理
相关搜索：牛肾盂肾炎棒杆菌荧光定量PCR试剂盒(染料法)，Corynebacterium renale qPCR Kit(SYBR)
肾棒状杆菌(Corynebacterium Renale)革兰氏染色阳性，为球杆状或棍棒状，呈单在、成丛或栅栏样排列。细菌性肾盂肾炎由肾棒状杆菌引起，主要发生于母牛，公牛少见，马和绵羊偶可发生。本病为尿源性感染，因此病原菌经尿道生殖道口感染后，先引起尿道炎、膀胱炎或子宫内膜炎，然后再逆行导致肾盂肾炎。由于肾组织损伤与尿液滞留，最终病畜可因尿毒症而死亡。病牛主要表现发热，食欲不振，尿频，尿少，尿因混有黏液、脓液、大量蛋白质、脓细胞和白细胞、脱落的上皮细胞等而浑浊带血色。尿液涂片或细菌培养可发现病原菌。严重病例常发生尿毒症。
- 即开即用，用户只需要提供DNA模板。
- 特异性高，引物是根据牛肾盂肾炎棒杆菌高度保守区设计，不会扩增其他细菌。
- 引物和扩增体系经过优化，灵敏性比常规PCR高100倍。
- 提供无传染性的PCR阳性对照，便于区分假阴性样品。
- 一管式操作，荧光PCR检测，不容易产生环境污染。
- 本产品只能用于科研，本试剂盒足够50次20μL体系的PCR。
| 组分 | 规格 |
| 2×qPCR MagicMix | 0.5mL |
| 荧光PCR专用模板稀释液 | 1mL |
| 牛肾盂肾炎棒杆菌染料法qPCR引物混合液 | 100μL |
| 牛肾盂肾炎棒杆菌染料法qPCR阳性对照(1×108拷贝/μL) | 50μL |
保存：-20℃，有效期一年。
一、制备标准曲线样品(以102～107拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)。
由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的DNA片段作为阳性对照。
- 标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。
- 用带芯枪头分别加入45μL荧光PCR专用模板稀释液，最好用带芯枪头，下同)。
- 在7号管中加入5μL阳性对照(其浓度为1×108拷贝/μL，试剂盒提供)，充分震荡1分钟，得1×107拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
- 换枪头，在6号管中加入5μL 1×107拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×106拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
- 换枪头，在5号管中加入5μL 1×106拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×105拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
- 重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品DNA的制备
- 用自选方法纯化样品的DNA，本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。
- 如果有N个样品，则需要进行N+2个样品提取，多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。本试剂盒免费赠送20次免DNA提取的核酸释放剂试用装，该释放剂的裂解液可以直接作为PCR模板，省略了DNA提取步骤。其使用手册可从www.bjbalb.com通过搜索产品名称核酸释放剂或产品货号BTN61202下载。
三、设置qPCR反应(20μL体系，在样品制备室进行)
- 如果进行定量分析，则标记N+9个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照，6个用于标准曲线样品。如果做定性分析，则6个标准曲线样品只选一个做(可以选4号，其余样品不变)。以下只介绍定量分析的反应设置。
- 在标记管中按下表加入各成分：
注：仅ABI7500、7700和7900仪器需要使用ROX作为对照，其他荧光PCR仪器(如iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、RotorGene3000、RotorGene 6000和LightCycler480)不需要使用ROX，则用水替代。成分 样品管
N+2个PCR阴性
对照管曲线样品管
(2～7管)2×qPCR MagicMix 10μL 10μL 各10μL 牛肾盂肾炎棒杆菌染料法qPCR引物混合液 2μL 2μL 各2μL 自备10×ROX(见注) 2μL 2μL 各2μL N+2个待测样品DNA模板 6μL - - 自备超纯水 - 6μL - 第7步所得标准曲线样品稀释液(2～7号) - - 各6μL - 盖上盖子后上机，按下面参数进行PCR(具体PCR参数可以根据仪器不同而自行优化)。
过程 温度 时间 预热 50℃ 2min 预变性 95℃ 10min PCR反应
(40个循环)95℃ 15sec 60℃ 1min(采集SYBR通道的荧光信号) 按仪器预设程序进行熔解曲线分析
四、数据处理
- 设定60℃～96℃范围的熔解曲线分析，排除假阳性。
- 如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品DNA浓度的log值，再推算出其浓度。
- 如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照Ct必须大于或等于40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct值应该小于或等于30。对待测样品，如果其Ct大于或等于40则为阴性，如果小于或等于35则为阳性。如果在35～40之间，则重复一次。重复实验的Ct值如果大于或等于40则为阴性，如果小于40，则为阳性。
相关搜索：牛肾盂肾炎棒杆菌荧光定量PCR试剂盒(染料法)，Corynebacterium renale qPCR Kit(SYBR)